某质粒上有SalⅠ、HindⅢ、BamH I三种限制酶切割位点，同时还含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因。利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程如图所示，请回答下列问题。

（1）将含有目的基因的DNA与质粒分别用Sal I酶切，酶切产物用_____________催化连接后，两个DNA片段的连接结果有       种。

（2）在构建重组质粒时，应选用          酶和  ______  酶对                  进行切割，以保证重组DNA序列的唯一性。

（3）为筛选出导入了重组质粒的农杆菌，应在培养基中加入________________，理由是                                                  。

（4）将转入抗盐基因的烟草细胞培育成完整的植株需要用__________________技术，愈伤组织经                  进而形成完整植株，此过程除营养物质外还必须向培养基中添加       。

答案

（1）DNA连接酶         3

（2）SalⅠ   HindⅢ （可换顺序）        质粒和含抗盐基因的DNA

（3）氨苄青霉素         重组质粒中含抗氨苄青霉素基因而抗四环素基因被破坏

（4）植物组织培养            细胞增殖和分化     生长素和细胞分裂素

考查基因工程的知识。

（1）连接DNA片段的酶为DNA连接酶。两个DNA片段的连接结果有三种：相同的DNA片段连接，不同的DNA片段连接。

（2）BamHI的酶切位点在目的基因（抗盐基因）中。若用此限制酶，会破坏目的基因的结构，最终得不到转基因抗盐烟草，所以选用SalⅠ和HindⅢ对质粒和含抗盐基因的DNA进行切割。

（3）由于SalⅠ和HindⅢ的酶切位点在抗四环素基因中。在构建重组质粒时，抗四环素基因结构遭到破坏，故只能在培养基中加入氨苄青霉素来筛选导入重组质粒的农杆菌。

（4）采用植物组织培养技术可将植物细胞培育成完整的植株。植物组织培养过程中，愈伤组织经细胞增殖和分化形成完整植株，此过程须向培养基中加入植物激素（如生长素和细胞分裂素）。