某质粒上有SalⅠ、HindⅢ、BamH I三种限制酶切割位点,同时还含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因。利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程如图所示,请回答下列问题。
(1)将含有目的基因的DNA与质粒分别用Sal I酶切,酶切产物用_____________催化连接后,两个DNA片段的连接结果有 种。
(2)在构建重组质粒时,应选用 酶和 ______ 酶对 进行切割,以保证重组DNA序列的唯一性。
(3)为筛选出导入了重组质粒的农杆菌,应在培养基中加入________________,理由是 。
(4)将转入抗盐基因的烟草细胞培育成完整的植株需要用__________________技术,愈伤组织经 进而形成完整植株,此过程除营养物质外还必须向培养基中添加 。
(1)DNA连接酶 3
(2)SalⅠ HindⅢ (可换顺序) 质粒和含抗盐基因的DNA
(3)氨苄青霉素 重组质粒中含抗氨苄青霉素基因而抗四环素基因被破坏
(4)植物组织培养 细胞增殖和分化 生长素和细胞分裂素
考查基因工程的知识。
(1)连接DNA片段的酶为DNA连接酶。两个DNA片段的连接结果有三种:相同的DNA片段连接,不同的DNA片段连接。
(2)BamHI的酶切位点在目的基因(抗盐基因)中。若用此限制酶,会破坏目的基因的结构,最终得不到转基因抗盐烟草,所以选用SalⅠ和HindⅢ对质粒和含抗盐基因的DNA进行切割。
(3)由于SalⅠ和HindⅢ的酶切位点在抗四环素基因中。在构建重组质粒时,抗四环素基因结构遭到破坏,故只能在培养基中加入氨苄青霉素来筛选导入重组质粒的农杆菌。
(4)采用植物组织培养技术可将植物细胞培育成完整的植株。植物组织培养过程中,愈伤组织经细胞增殖和分化形成完整植株,此过程须向培养基中加入植物激素(如生长素和细胞分裂素)。