家蚕细胞具有高效表达外源基因的能力。将人干扰素基因导入家蚕细胞并大规模培养,可提取干扰素用于制药。
(1)进行转基因操作前,需用 酶短时处理幼蚕组织,以便获得单个细胞。
(2)为使干扰素基因在家蚕细胞中高效表达,需要把来自cDNA文库的干扰素基因片段正确插入表达载体的 和 之间。
(3)采用PCR技术可验证干扰素基因是否已经导入家蚕细胞。该PCR反应体系的主要成分应包含:扩增缓冲液(含Mg2+)、水、4种脱氧核糖核苷酸、模板DNA、 和 。
(4)利用生物反应器培养家蚕细胞时,贴壁生长的细胞会产生接触抑制。通常将多孔的中空薄壁小玻璃珠放入反应器中,这样可以 ,增加培养的细胞数量,也有利于空气交换。
答案:(1)胰蛋白(或胶原蛋白) (2)启动子 终止子 (3)对干扰素基因特异的DNA引物对 Taq DNA聚合酶 (4)扩大细胞贴壁生长的附着面积
解析:(1)动物细胞间存在蛋白质,所以要用胰蛋白酶处理幼蚕组织,以获得单细胞。
(2)目的基因应插入表达载体的启动子和终止子之间。
(3)PCR扩增技术所需条件除扩增缓冲液、水、脱氧核苷酸、模板DNA除外,还需要DNA引物和热稳定DNA聚合酶。
(4)细胞有贴壁生长现象,增殖到一定程度会相互接触抑制生长,所以在生物反应器中放入多孔的中空薄壁玻璃珠,可以增大细胞贴壁面积,有利于细胞增殖,也有利于空气交换。
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