• 难度: 使用次数:84 入库时间:2017-10-10

    Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如图:

    1)步骤①中,在核移植前如何对卵母细胞进行改造?                  

    2)步骤②中,重组胚胎培养到          期时,可从其         细胞分离出ES细胞。

    3)步骤③中,需要构建含有基因Rag2的表达载体。可以根据已知的Rag2基因的                  设计引物。利用PCR技术扩增Rag2基因片段时,是依据什么具体手段使Rag2基因双链解开,然后又复性的?                                  

    HindIIIPstI限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段。为将该片段直接连接到表达载体,所选择的表达载体上应具有                     酶的酶切位点。

    4)为检测Rag2基因的表达情况,可提取治疗后小鼠骨髓细胞的           ,用相应抗体进行杂交实验。


    答案

    1)去除卵母细胞的细胞核(去核)     2)囊胚     内细胞团     

    3)核苷酸序列         先高温加热至94℃使DNA变性解旋,后降低温度使DNA复性延伸(3分)        HindⅢ和Pst      4)蛋白质



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