为了有效控制水稻害虫的危害，中国农业科学院和华中农业大学合作，成功地获得了转Bt基因的二倍体水稻。该基因来源于苏云金芽孢杆菌，基因的表达产物Bt毒蛋白具有良好的杀虫效果。请回答：

（1）若知道Bt毒蛋白的氨基酸序列，则可以推测出Bt基因的核苷酸序列，但推测出的核苷酸序列并不是唯一的，其原因是　   　。在已知Bt基因的核苷酸序列之后，再通过　   　方法获取目的基因。

（2）获得Bt基因后，在体外可以通过　   　技术进行扩增，该技术需要的条件是　   　、酶、dNTP、模板，其中的酶是　   　。然后构建基因表达载体，基因表达载体中除了具的基因、启动子和终止子之外，还需具有　   　。

（3）将Bt基因导入水稻细胞中时不宜采用农杆菌转化法，最可能的原因是　   　。

（4）可采用抗虫接种实验的方法，在　   　水平上鉴定Bt基因在受体植株内是否成功表达。

答案

（1）密码子具有简并性    人工合成

（2）PCR     引物       Taq DNA聚合酶     标记基因和复制原点

（3）水稻是单子叶植物，而农杆菌对单子叶植物没有感染能力

（4）个体

【分析】基因工程技术的基本步骤：

（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。

（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。

（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。

（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因﹣﹣DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA﹣﹣分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质﹣﹣抗原﹣抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

【解答】（1）若知道Bt毒蛋白的氨基酸序列，则可以推测出Bt基因的核苷酸序列，但由于密码子具有简并性，因此推测出的核苷酸序列并不是唯一的。在已知Bt基因的核苷酸序列之后，再通过人工合成

方法获取目的基因。

（2）体外扩增目的基因可采用PCR技术，该技术需要的条件是引物、酶、dNTP、模板，其中的酶是Taq DNA聚合酶。基因表达载体的组成包括目的基因、启动子、终止子、标记基因和复制原点。

（3）将Bt基因导入水稻细胞中时不宜采用农杆菌转化法，最可能的原因是水稻是单子叶植物，而农杆菌对单子叶植物没有感染能力。

（4）抗虫接种实验属于个体水平上的鉴定。

【点评】本题考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的概念、原理及操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节，能结合所学的知识准确答题。