为了对重金属污染的土壤进行生物修复，研究者将从杨树中克隆的重金属转运蛋白（HMA3）基因与外源高效启动子连接，导入杨树基因组中（如图）。

为检测获得的转基因杨树苗中是否含有导入的HMA3基因，同时避免内源HMA3基因的干扰，在进行PCR扩增时，应选择的引物组合是（    ）

A．①+③                    B．①+②                    C．③+②                    D．③+④

SARS冠状病毒（SARS-CoV）的N蛋白是一种重要的结构蛋白，位于病毒颗粒的核心部分，并与病毒RNA结合。在病毒的包装等过程中起重要作用。因此制备抗SARS-CoVN蛋白的单克隆抗体（mAb），对于诊断和治疗疾病具有重要意义。用SARS-CoV制备单克隆抗体的流程如下图：

（1）为了获得大量的SARS冠状病毒N蛋白目的基因，可以采用PCR技术在体外扩增，该技术还需要dNTP、_______酶以及引物等，扩增三轮需要的引物数量为___________个。

（2）若双链DNA几乎具有等量的净电荷，且在高于等电点的pH溶液中带负电荷。利用琼脂糖凝胶电泳进行分离和纯化DNA分子主要依据_______不同，采用外加电场使其分开。在电泳槽中还需要加入______作为参照物进行鉴定。

（3）小鼠被抗原蛋白免疫后，可以从___________中获取细胞Ⅰ。细胞Ⅰ中可能包含多种能产生抗体的细胞，原因是______________________。

（4）为了分离出只能产生mAb的细胞Ⅱ，需要用___________技术对杂交瘤细胞进行筛选。目前可将图中的___________作为疫苗，预防SARS冠状病毒引发的疾病。

如图所示为血红蛋白提取和分离的部分装置，回答下列问题。

（1）在进行样品处理时首先要对红细胞进行洗涤，目的是_______________。红细胞破碎后，通过_________________法将血红蛋白从混合液中分离出来，图甲所示为分离结果。若红细胞洗涤次数过少，则图甲结果可能会_____________。

（2）图乙装置可用于_________过程。现有一定量的血红蛋白溶液，进行上述操作时若要尽快达到理想的实验效果，可以_____________________（写出一种方法）。

（3）通过凝胶色谱法将样品进一步纯化，最后经SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定。凝胶色谱法是根据_________________分离蛋白质的方法。加人SDS可以使蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率完全取决于_________________。

下面是将某细菌的基因A导入大肠杆菌内，制备“工程菌”的示意图。

请据图回答：

⑴获得A有两条途径：一是以A的mRNA为模板，在_______酶的催化下，合成互补的单链DNA，然后在________作用下合成双链DNA，从而获得所需基因；二是根据目标蛋白质的_______序列，推测出相应的mRNA序列，然后按照碱基互补配对原则，推测其DNA的________序列，再通过化学方法合成所需基因。

⑵利用PCR技术扩增DNA时，需要在反应体系中添加的有机物质有________、_______、4种脱氧核苷酸三磷酸和耐热性的DNA聚合酶，扩增过程可以在PCR扩增仪中完成。

⑶由A和载体B拼接形成的C通常称为______。

⑷在基因工程中，常用Ca^2＋处理D，其目的是______________________。

科研人员通过观察老年（65岁~79岁）14例、高龄（80岁~89岁）16例及长寿老人（≧90岁）12例，肝、脾组织基因组DNA含量的变化及差异，探讨衰老进程中DNA含量变化的规律，并为今后的衰老相关研究提供实验数据。实验的主要操作步骤如下：

一、称取组织100mg放入-80℃冰箱；

二、将组织放入1.5ml离心管中，同时加入样品裂解液，并用微量电动匀浆器充分匀浆；

三、加入蛋白酶，56℃消化48h，90℃高温蛋白质变性1h；

四、加入______酶和缓冲液，37℃水浴锅中放置1h，以去除样品中的RNA；

五、加入等体积的冷乙醇，离心取‚______；

六、缓冲液溶解DNA，进行DNA的含量和纯度检测。

实验结果如下表：

(注：表中OD260反映溶液中核酸的浓度，OD280反映溶液中蛋白质或氨基酸的浓度。理论上，纯DNA溶液的OD260/OD280为1.8。若比值大于1.8表示存在RNA残留，若小于1.8表示存在蛋白质污染)

请据表回答：

（1）推测第二步中样品裂解液的作用是______。

（2）补全实验步骤（______________）；（______________）。

（3）与肝组织相比，从脾组织中提取的DNA中含有的______杂质更多，因此在提取脾组织中DNA时，上述实验流程可以怎样改进：______。

（4）无论肝组织还是脾组织中，高龄组DNA含量总比老年组少，说明在一定年龄范围内， DNA含量随着年龄的增长逐渐减少，说明DNA含量减少可能是______的分子基础。但长寿老人比高龄组的DNA含量显著增高，科学家推测可能长寿老人体内存在长寿基因，保持了对DNA______，减少了DNA的损伤，从而延缓了细胞的衰老。

（5）本研究可能存在一些不足，请指出其中的一项是______。