胚胎工程技术可用于良种奶牛的繁殖。请回答下列问题：

（1）用激素处理可促进良种奶牛超数排卵，对收集到的卵子长期保存时一般保存在______________中。显微受精技术借助显微操作仪可将精子直接注入卵子的细胞质中，因而不受精子数量和活力的限制，在这个过程中，注射针需要穿过卵子的____________（至少两项）等结构。

（2）在良种奶牛的繁殖过程中需要进行性别控制。一种方法是利用X精子和Y精子分离技术获取X精子，受精卵全部发育成雌牛。另一种方法是从囊胚上取少量____________，进行DNA分析鉴定性别。SRY基因是Y染色体的性别控制基因，在对取样胚胎细胞中的DNA进行PCR扩增后，用SRY特异性探针对扩增产物进行检测，出现阳性反应者，其胚胎为____________（填雌性或雄性）。

（3）胚胎分割可增加胚胎数量，在胚胎分割时应注意将内细胞团均分，原因是________________________________________________。

（4）良种奶牛胚胎移植的优点是____________________________________。移植胚胎不会与代孕母牛发生免疫排斥反应，因此，一般情况下，良种奶牛胚胎移植的成功率主要取决于____________________________________。

下列生物技术操作对遗传物质的改造，不会遗传给子代的是

A．将胰岛素基因表达质粒转入大肠杆菌，筛选获得基因工程菌

B．将花青素代谢基因导入植物体细胞，经组培获得花色变异植株

C．将肠乳糖酶基因导入奶牛受精卵，培育出产低乳糖牛乳的奶牛

D．将腺苷酸脱氨酶基因转入淋巴细胞后回输患者，进行基因治疗

图1是某基因工程中构建重组质粒的过程示意图，载体质粒P0具有四环素抗性基因（tet^r)和氨苄青霉素抗性基因（amp^r）。请回答下列问题：

（1）EcoRV酶切位点为，EcoR V酶切出来的线性载体P1为___________末端。

（2）用TaqDNA聚合酶进行PCR扩增获得的目的基因片段，其两端各自带有一个腺嘌呤脱氧核苷酸。载体P1用酶处理，在两端各添加了一个碱基为___________的脱氧核苷酸，形成P2；P2和目的基因片段在__________酶作用下，形成重组质粒P3。

（3）为筛选出含有重组质粒P3的菌落，采用含有不同抗生素的平板进行筛选，得到A、B、C三类菌落，其生长情况如下表（“+”代表生长，“﹣”代表不生长）。根据表中结果判断，应选择的菌落是__________（填表中字母）类，另外两类菌落质粒导入情况分别是_____、________________。

（4）为鉴定筛选出的菌落中是否含有正确插入目的基因的重组质粒，拟设计引物进行PCR鉴定。图2所示为甲、乙、丙3条引物在正确重组质粒中的相应位置，PCR鉴定时应选择的一对引物是__________。某学生尝试用图中另外一对引物从某一菌落的质粒中扩增出了400bp片段，原因是_______________。

枯草芽孢杆菌可分泌纤维素酶。研究者筛选到一株降解纤维素能力较强的枯草芽孢杆菌菌株（B菌），从中克隆得到了一种纤维素酶（C₁酶）基因。将获得的C₁酶基因与高效表达载体（HT质粒）连接，再导入B菌，以期获得降解纤维素能力更强的工程菌。

（1）纤维素属于__________糖，因此经过一系列酶催化最终可降解成单糖，该单糖是__________。

（2）对克隆到的C₁酶基因测序，与数据库中的C₁酶基因编码序列相比有两个碱基对不同，但两者编码出的蛋白的氨基酸序列相同，这是因为____________________。

（3）C₁酶基因以B链为转录模板链，转录时mRNA自身的延伸方向为5'→3'。为了使C₁酶基因按照正确的方向与已被酶切的HT质粒连接，克隆C₁酶基因时在其两端添加了Sma I和BamH I的酶切位点。该基因内部没有这两种酶切位点。图1中酶切位点1和2所对应的酶分别是__________。

（4）将纤维素含量为20%的培养基分为三组，一组接种工程菌，对照组1不进行处理，对照组2进行相应处理。在相同条件下培养96小时，检测培养基中纤维素的含量。结果（图2）说明工程菌降解纤维素的能力最强。对照组2的处理应为____________________。

（5）预期该工程菌在处理废弃物以保护环境方面可能的应用__________。（举一例）

径柳匙叶草是一种泌盐植物。科研工作者将径柳匙叶草液泡膜Na⁺/K⁺逆向转运蛋白基因（TaNHX2基因）转移到棉花细胞内，获得了转基因耐盐棉花新品种。图1是获取的含有目的基因的DNA片段，Sau3AI、EcoRI、BamHI为三种限制酶，图中箭头所指为三种限制酶的切点；图2是三种限制酶的识别序列与酶切位点示意图；图3是土壤农杆菌中用于携带目的基因的Ti质粒结构示意图，请分析回答问题：

（1）将含有径柳匙叶草不同基因的DNA片段导入受体菌的群体中储存，再根据TaNHX2基因的特定核苷酸序列从中提取图1的片段，此法为从__________获取目的基因。

（2）不能在径柳匙叶草根尖分生区细胞中获得TaNHX2基因的mRNA，其原因是______________________________。

（3）若用BamHI切割图1所示的DNA片段，获得目的基因，则需选用_______切割图3所示质粒，以便构建基因表达载体，该方案的缺陷是_________。故切割图1所示DNA片段的最佳方案是选用____________酶。

（4）用上述最佳方案构建基因表达载体，所得重组质粒____________（选填“能”“不能”或“不一定能”）被BamHI切割。

（5）图3中，质粒上的抗生素抗性基因的作用是_________________________________。

（6）为了检测技术成果，科研工作者将转基因棉花种植在盐碱地，观察其生长状况，这属于___________________________水平的检测。