人的血清白蛋白（HAS）在临床上需求量很大，目前通常将人的血清白蛋白基因转入奶牛细胞中，利用牛的乳腺细胞生产血清白蛋白，基本步骤如下：

Ⅰ.采集良种供体奶牛的卵母细胞和精子，通过体外受精，形成受精卵；

Ⅱ.将人血清白蛋白基因导入奶牛受精卵，形成重组细胞；

Ⅲ.电脉冲刺激重组细胞，促使其形成早期胚胎；

Ⅳ.将胚胎移植到受体母牛的子宫中，最终发育成转基因小牛。

请回答下列问题：

（1）步骤Ⅰ中，卵母细胞与精子结合过程中防止多精入卵的生理反应包括_____________ 。自然条件下，受精卵是在雌性动物的_________内完成的。

（2）步骤Ⅱ中，将人的血清白蛋白基因导入牛受精卵最为有效的方法是___________ 。导入基因前，需要将血清白蛋白基因与奶牛乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起，这一步骤称为___________。

（3）步骤Ⅲ中，进行动物早期胚胎的体外培养时，培养液中除了含有各种无机盐和有机盐、维生素、氨基酸、核苷酸等营养成分外，还需要添加_______ 和动物血清。一般情况下，通常在合成培养基中加入一定量的____________ ，防止杂菌污染。

（4）步骤Ⅳ中，应选择性别为_______的奶牛胚胎进行移植。

答案

透明带反应、卵细胞膜反应    输卵管    显微注射技术    构建基因表达载体    激素    抗生素    雌性   

【解析】

防止多精入卵的两道屏障依次是透明带反应、卵细胞膜反应；受精作用的场所是输卵管；基因工程的核心是基因表达载体的构建，将目的基因导入动物细胞的方法是显微注射技术；早期培养时，培养液中含有各种无机盐和有机盐、维生素、氨基酸、核苷酸、激素和血清等物质。培养液中加入抗生素的作用是防止杂菌污染；乳腺生物反应器需要在乳汁中获得所需要的物质，需要选择雌性的胚胎。

【详解】

（1）防止多精入卵的两道屏障是透明带反应和卵细胞膜反应。自然条件下，受精是在雌性动物的输卵管内完成的。 
（2）将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；基因工程的操作步骤中，在导入目的基因之前，需要构建基因表达载体，即将血清白蛋白基因与奶牛乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起。
（3）早期胚胎培养的培养液中除了各种无机盐、有机盐、维生素、氨基酸、核苷酸等营养成分外，还需要添加激素和血清等天然成分。一般情况下，通常在合成培养基中加入一定量的抗生素，其目的是防止污染。
（4）血清白蛋白要从乳汁中提取，只有雌性奶牛才能产生乳汁，因此胚胎移植时，必须选取雌性奶牛的胚胎进行移植。

【点睛】

注意受精过程的变化顺序：顶体反应→穿越放射冠→穿越透明带（透明带反应）→卵细胞膜反应（卵黄膜封闭作用）→卵子完成减数第二次分裂并释放第二极体→雌雄原核的形成、核膜消失，雌、雄原核融合形成合子→第一次卵裂开始。