酵母菌生长的最适宜温度在 18~30℃ 之间，能在 pH 为 3~7 ． 5 的范围内生长，在氧气充足的环境中主要以出芽生殖的方式快速增殖。大约每 1 ． 5~2 小时增殖一代。某研究性学习小组据此探究酵母菌种群在不同的培养液浓度和温度条件下种群密度的动态变化，进行了如下实验，实验操作步骤如下：
第一步：配制无菌马铃薯葡萄糖培养液和活化酵母菌液。
第二步：利用相同多套装置，按下表步骤操作。
| 装置编号 | | A | B | C | D |
| 装置容器内的溶液 | 无菌马铃薯葡萄糖培养液 /ml | 10 | 10 | 5 | 5 |
| 无菌水 /ml | — | — | 5 | 5 | |
| 活化酵母菌液 /ml | 0 ． 1 | 0 ． 1 | 0 ． 1 | 0 ． 1 | |
| 温度 /℃ | 5 | 25 | 5 | 25 | |
第三步：用血细胞计数板计数装置中起始酵母菌数目，做好记录。
第四步：将各装置放在其他条件相同且适宜的条件下培养。
第五步：连续 7 天，每天随机抽时间取样计数，做好记录。
回答下列问题：
(1) 改正实验操作步骤中的一处错误 _____ 。
(2) 酵母菌的代谢类型 _____ 。该实验的自变量是 _____ 。
(3) 某同学第 5 天在使用血细胞计数板计数时做法如下：
① 振荡摇匀试管，取 1mL 培养液并适当稀释（稀释样液的无菌水中加入了几滴台盼蓝染液）。
② 先将 _____ 放在血细胞计数板的计数室上，用吸管吸取稀释后的培养液滴于其边缘，让培养液自行渗入，多余培养液用吸水纸吸去，制作好临时装片。
③ 显微镜下观察计数：在观察计数时只记 _____ （填 “ 被 ” 或 “ 不被 ” ）染成蓝色的酵母菌。
④ 该小组同学在一次实验中取样液后，并稀释 10 倍，用图 1 所示的血细胞计数板（ 1 mm×1 mm×0 ． 1 mm ， 400 个小方格）计数。若用图 2 的计数结果作为每个中方格的平均值（ · 代表酵母菌），则此样液中酵母菌的密度是 _____ 个 /mL 。
答案
(1) （第五步）应每天相同时间取样
(2) 异养兼性厌氧型 培养液浓度和温度
(3) 盖玻片 不被 5 ． 25×10 7
【分析】探究酵母菌种群数量的变化实验中，实验流程为：酵母菌培养（液体培养基、无菌条件） → 振荡培养基（使酵母菌均匀分布于培养基中） → 观察并计数 → 重复操作以上两个步骤（每天计数酵母菌数量的时间要固定） → 绘图分析。
（ 1 ）
该实验中，每天取样时间间隔应相同，所得的实验数据才更加准确，画出的变化曲线也更加具有参考价值，因此第五步中 “ 每天在不同时间取样计数 ” 应改为 “ 每天在同一时间（定时）取样 ” 。
（ 2 ）
酵母菌的同化作用类型为异养型，异化作用类型为兼性厌氧型；由图表分析可知，该实验的自变量为葡萄糖培养液的浓度和培养温度。
（ 3 ）
② 将酵母菌滴加到血球计数板上时，应先将盖玻片放在计数室上，再用吸管吸取稀释后的培养液滴于其边缘，让培养液自行渗入，多余培养液用滤纸吸去，制作好临时装片。
③ 由于细胞膜具有选择透过性，因此不能被染成蓝色的酵母菌为活菌，所以显微镜下观察计数时，应只计数不被染成蓝色的。
④ 计数时，应该将方格内的酵母菌计数在内，对于边界线上的酵母菌应该计数相邻两边及其夹角中的个体，则图 2 中方格中酵母菌数量为 21 个，若以图 2 的计数结果作为应计数的 5 个中方格的平均值，则此样液中酵母菌的密度是 21×25×100×1000=5.25×10 7 个 /mL 。
