如图甲表示某细菌的质粒中相关限制酶的切割位点，图乙表示目的基因所在的DNA中相关限制酶的切割位点．请分析并回答下列问题：
（1）用SmaⅠ限制酶处理图甲所示的质粒会得到 个DNA片段，用AluⅠ处理图乙所示的外源DNA会增加2个游离的磷酸基团．
（2）为了避免目的基因和质粒在酶切后产生的片段发生自身环化或任意连接，以及便于筛选需要，在实际操作中，一般应选用 （填限制酶名称）同时酶切质粒和含目的基因的外源DNA．再用DNA连接酶处理．如果是用PCR技术扩增目的基因，设计引物是关键，但在扩增时退火温度一般为55～60℃，对于（A+T）%＞50%，一般用55℃；（A+T）%≤50%时一般用60℃，原因是 ．
（3）为了筛选获得含有重组质粒的大肠杆菌，实验人员首先将经转化处理过的大肠杆菌接种在含 （抗生素）的培养基中，然后用影印法将该培养基上的菌落按原来的方向印在含 （抗生素）培养基上，以筛选获得含重组质粒的细菌．在含四环素培养基中能生长繁殖，而在含氯霉素培养基中不能生长繁殖的是导入了 的大肠杆菌．
（4）经检测：在上述导入了重组质粒的大肠杆菌菌株中，目的基因正常转录形成了mRNA，但其所控制合成的蛋白质却并不具有生物活性，最可能的原因是 ．
答案
（1）22
（2）PstⅠ和HindⅢ酶G与C（之间是三个氢键）比例越高越稳定
（3）四环素氯霉素重组质粒（或目的基因）
（4）大肠杆菌细胞内缺乏内质网与高尔基体（或大肠杆菌缺乏生物膜系统），不能对多肽链进行折叠、组装与修饰
