胚胎工程技术可用于良种奶牛的繁殖。请回答下列问题：

（1）用激素处理可促进良种奶牛超数排卵，对收集到的卵子长期保存时一般保存在______________中。显微受精技术借助显微操作仪可将精子直接注入卵子的细胞质中，因而不受精子数量和活力的限制，在这个过程中，注射针需要穿过卵子的____________（至少两项）等结构。

（2）在良种奶牛的繁殖过程中需要进行性别控制。一种方法是利用X精子和Y精子分离技术获取X精子，受精卵全部发育成雌牛。另一种方法是从囊胚上取少量____________，进行DNA分析鉴定性别。SRY基因是Y染色体的性别控制基因，在对取样胚胎细胞中的DNA进行PCR扩增后，用SRY特异性探针对扩增产物进行检测，出现阳性反应者，其胚胎为____________（填雌性或雄性）。

（3）胚胎分割可增加胚胎数量，在胚胎分割时应注意将内细胞团均分，原因是________________________________________________。

（4）良种奶牛胚胎移植的优点是____________________________________。移植胚胎不会与代孕母牛发生免疫排斥反应，因此，一般情况下，良种奶牛胚胎移植的成功率主要取决于____________________________________。

下列生物技术操作对遗传物质的改造，不会遗传给子代的是

A．将胰岛素基因表达质粒转入大肠杆菌，筛选获得基因工程菌

B．将花青素代谢基因导入植物体细胞，经组培获得花色变异植株

C．将肠乳糖酶基因导入奶牛受精卵，培育出产低乳糖牛乳的奶牛

D．将腺苷酸脱氨酶基因转入淋巴细胞后回输患者，进行基因治疗

图1是某基因工程中构建重组质粒的过程示意图，载体质粒P0具有四环素抗性基因（tet^r)和氨苄青霉素抗性基因（amp^r）。请回答下列问题：

（1）EcoRV酶切位点为，EcoR V酶切出来的线性载体P1为___________末端。

（2）用TaqDNA聚合酶进行PCR扩增获得的目的基因片段，其两端各自带有一个腺嘌呤脱氧核苷酸。载体P1用酶处理，在两端各添加了一个碱基为___________的脱氧核苷酸，形成P2；P2和目的基因片段在__________酶作用下，形成重组质粒P3。

（3）为筛选出含有重组质粒P3的菌落，采用含有不同抗生素的平板进行筛选，得到A、B、C三类菌落，其生长情况如下表（“+”代表生长，“﹣”代表不生长）。根据表中结果判断，应选择的菌落是__________（填表中字母）类，另外两类菌落质粒导入情况分别是_____、________________。

（4）为鉴定筛选出的菌落中是否含有正确插入目的基因的重组质粒，拟设计引物进行PCR鉴定。图2所示为甲、乙、丙3条引物在正确重组质粒中的相应位置，PCR鉴定时应选择的一对引物是__________。某学生尝试用图中另外一对引物从某一菌落的质粒中扩增出了400bp片段，原因是_______________。

枯草芽孢杆菌可分泌纤维素酶。研究者筛选到一株降解纤维素能力较强的枯草芽孢杆菌菌株（B菌），从中克隆得到了一种纤维素酶（C₁酶）基因。将获得的C₁酶基因与高效表达载体（HT质粒）连接，再导入B菌，以期获得降解纤维素能力更强的工程菌。

（1）纤维素属于__________糖，因此经过一系列酶催化最终可降解成单糖，该单糖是__________。

（2）对克隆到的C₁酶基因测序，与数据库中的C₁酶基因编码序列相比有两个碱基对不同，但两者编码出的蛋白的氨基酸序列相同，这是因为____________________。

（3）C₁酶基因以B链为转录模板链，转录时mRNA自身的延伸方向为5'→3'。为了使C₁酶基因按照正确的方向与已被酶切的HT质粒连接，克隆C₁酶基因时在其两端添加了Sma I和BamH I的酶切位点。该基因内部没有这两种酶切位点。图1中酶切位点1和2所对应的酶分别是__________。

（4）将纤维素含量为20%的培养基分为三组，一组接种工程菌，对照组1不进行处理，对照组2进行相应处理。在相同条件下培养96小时，检测培养基中纤维素的含量。结果（图2）说明工程菌降解纤维素的能力最强。对照组2的处理应为____________________。

（5）预期该工程菌在处理废弃物以保护环境方面可能的应用__________。（举一例）

新型冠状病毒表面的S蛋白是主要的病毒抗原。研究人员为研制S蛋白疫苗，做了如下实验，请回答：

（1）过程①是______________，过程②是______________，过程③常用的方法是______________。

（2）采用PCR技术获得大量的S基因进行体外扩增，其前提是____________________________，以便根据这一序列合成引物。PCR过程所需的酶是____________________。

（3）通过上述过程⑥得到的蛋白制备的疫苗比④效果更好，从细胞结构差异的角度分析，原因是___________。

（4）利用S蛋白为抗原制备单克隆抗体，运用的生物工程技术有____________________________。（答出一项即可）