生态文明建设已成为我国的基本国策。水中雌激素类物质（ E 物质）污染会导致鱼类雌性化等异常，并通过食物链影响人体健康和生态安全。原产南亚的斑马鱼，其肌细胞、生殖细胞等存在 E 物质受体，且幼体透明。科学家将绿色荧光蛋白（ GFP ）等基因转入斑马鱼，建立了一种经济且快速的水体 E 物质监测方法。

(1) 将表达载体导入斑马鱼受精卵的最佳方式是 。

(2) 为监测 E 物质，研究者设计了下图所示的两种方案制备转基因斑马鱼，其中 ERE 和酵母来源的 UAS 是两种诱导型启动子，分别被 E 物质 - 受体复合物和酵母来源的 Gal4 蛋白特异性激活，启动下游基因表达。与方案 1 相比，方案 2 的主要优势是 ，因而被用于制备监测鱼（ MO ）。

(3) 现拟制备一种不育的监测鱼 SM ，用于实际监测。 SM 需经 MO 和另一亲本（ X ）杂交获得。欲获得 X ，需从以下选项中选择启动子和基因，构建表达载体并转入野生型斑马鱼受精卵，经培育后进行筛选。请将选项的序号填入相应的方框中。

Ⅰ. 启动子： 。

①ERE②UAS③ 使基因仅在生殖细胞表达的启动子（ P 生） ④ 使基因仅在肌细胞表达的启动子（ P 肌）

Ⅱ. 基因：

A ． GFP B ． Gal4 C ．雌激素受体基因（ ER ） D ．仅导致生殖细胞凋亡的基因（ dg ）

(4)SM 不育的原因是：成体 SM 自身产生雌激素，与受体结合后 造成不育。

(5) 使拟用于实际监测的 SM 不育的目的是 。

答案

(1) 显微注射

(2) 监测灵敏度更高

(3)     ②     D

(4) 激活 ERE 诱导 Gal4 表达， Gal4 结合 UAS 诱导 dg 表达，生殖细胞凋亡

(5) 避免转基因斑马鱼逃逸带来生物安全问题

【分析】将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。

【详解】（ 1 ）将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法，所以将表达载体导入斑马鱼受精卵的最佳方式是显微注射法。

（ 2 ）由图可知，方案 1E 物质 - 受体复合物激活 ERE ，使 GFP 基因表达，方案 2 E 物质 - 受体复合物先激活 ERE 获得 Gal4 蛋白，然后 Gal4 蛋白激活 UAS 启动子，使 GFP 基因表达，方案 2GFP 蛋白表达量大，更灵敏。

（ 3 ） MO 和另一亲本（ X ）杂交获得 SM ， MO 是方案 2 获得，所以亲本 X 启动子选择 UAS 。要获得 SM 是不育个体， MO 是可育的所以 X 必须有仅导致生殖细胞凋亡的基因（ dg ）。

（ 4 ）成体 SM 自身产生雌激素，与受体结合后形成复合物，激活 ERE 诱导 Gal4 表达， Gal4 与 UAS 启动子结合诱导 dg 表达，使生殖细胞凋亡。

（ 5 ）监测鱼属于转基因生物，目前安全性不确定，为了避免转基因斑马鱼逃逸带来生物安全问题，需要 SM 不育。