以我国科学家为主的科研团队将 OSNL （即 4 个基因 Oct4 ／ Sox2 ／ Nanog ／ Lin28A 的缩写）导入黑羽鸡胚成纤维细胞（ CEFs ），诱导其重编程为诱导多能干细胞（ iPS ），再诱导 iPS 分化为诱导原始生殖细胞（ iPGCs ），然后将 iPGCs 注射到孵化 2.5 天的白羽鸡胚血管中，最终获得具有黑羽鸡遗传特性的后代，实验流程如图。回答下列问题。

(1)CEFs 是从孵化 9 天的黑羽鸡胚中分离获得的，为了获得单细胞悬液，鸡胚组织剪碎后需用 处理。动物细胞培养通常需要在合成培养基中添加 等天然成分，以满足细胞对某些细胞因子的需求。

(2) 体外获取 OSNL 的方法有 （答出 1 种即可）。若要在 CEFs 中表达外源基因的蛋白，需构建基因表达载体，载体中除含有目的基因和标记基因外，还须有启动子和 等。启动子是 识别和结合的部位，有了它才能驱动 。

(3)iPS 细胞和 iPGCs 细胞的形态、结构和功能不同的根本原因是 。

(4) 诱导 iPS 细胞的技术与体细胞核移植技术的主要区别是 。

(5) 该实验流程中用到的生物技术有 （答出 2 点即可）。

答案

(1) 胰蛋白酶、胶原蛋白酶等     动物血清

(2)     PCR 技术、人工合成法     终止子 RNA 聚合酶     目的基因转录出 mRNA ，最终表达出所需要的蛋白质

(3) 基因的选择性表达

(4) 诱导 iPS 细胞的技术是将已经分化的细胞诱导为类似胚胎干细胞的一种细胞（ iPS ），再诱导 iPS 分化为诱导原始生殖细胞（ iPGCs ）的技术，而细胞核移植技术是将动物的一个细胞的细胞核移入去核的卵母细胞内，使这个重组的细胞发育为胚胎，继而发育为动物个体的技术

(5) 基因工程、动物细胞培养

【分析】胚胎干细胞（ ES 细胞）具有自我更新及多向分化潜能，为发育学、遗传学、人类疾病的发病机理与替代治疗等研究提供非常宝贵的资源。 iPS 细胞技术是借助基因导入技术将某些特定因子基因导入动物或人的体细胞，以将其重编程或诱导为 ES 细胞样的细胞，即 iPS 细胞。

【详解】（ 1 ）动物细胞培养时，鸡胚组织剪碎后需用胰蛋白酶处理，以获得单细胞悬液。动物细胞培养时一般需要在合成培养基中添加血清等天然成分，以满足细胞对某些细胞因子的需求。

（ 2 ） OSNL 为目的基因，体外获取目的基因可通过 PCR 技术大量扩增或通过人工合成法来合成。基因表达载体中除目的基因外，还必须有启动子、终止子、复制原点和标记基因等。启动子是一段有特殊结构的 DNA 片段，位于基因的首端，它是 RNA 聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出 mRNA ，最终获得所需要的蛋白质。

（ 3 ）据图可知，由 iPS 细胞诱导形成 iPGCs 细胞经过了细胞分化，该过程遗传物质没有改变，导致其细胞的形态、结构和功能不同的根本原因是基因的选择性表达。

（ 4 ）诱导 iPS 细胞的技术是将已经分化的细胞诱导为类似胚胎干细胞的一种细胞（ iPS ），再诱导 iPS 分化为诱导原始生殖细胞（ iPGCs ）的技术，而细胞核移植技术是将动物的一个细胞的细胞核移入去核的卵母细胞内，使这个重组的细胞发育为胚胎，继而发育为动物个体的技术。

（ 5 ）由图可知，该实验流程中将 OSNL 基因导入鸡胚成纤维细胞利用了基因工程技术，诱导多能干细胞过程利用了动物细胞培养的技术。