番茄灰霉病菌严重影响番茄生产，枯草芽孢杆菌可以产生对多种病原菌具有抑制作用的蛋白质。为探究枯草芽孢杆菌能否用于番茄灰霉病的生物防治，研究者设计了相关实验。回答下列问题：

(1) 检测枯草芽孢杆菌对番茄灰霉病菌的抑制作用时，取适量 ________ 菌液涂布于固体培养基上，将无菌滤纸片（直径 5mm ）在 ________ 菌液中浸泡后覆盖于固体培养基中心，数秒后取出滤纸片，培养皿倒置培养后测量 ________ 大小以判定抑菌效果。

(2) 枯草芽孢杆菌为好氧微生物，液体培养时应采用 ________ （填 “ 静置 ” 或 “ 摇床震荡 ” ）培养。培养过程中抽样检测活菌数量时，应采用 ________ （填 “ 稀释涂布平板法 ” 或 “ 显微镜直接计数法 ” ），其原因是 ________ 。

(3) 电泳分离蛋白质混合样品的原理是 ________ 。利用 SDS- 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定枯草芽孢杆菌的抗菌蛋白分子量时， SDS 的作用是 ________ 。

(4) 枯草芽孢杆菌长期保藏时，常以其 ________ 作为保藏对象。

答案

(1) 番茄灰霉病菌     枯草芽孢杆菌     抑菌圈

(2) 摇床震荡     稀释涂布平板法     用稀释涂布平板法在培养基上看到的每一个菌落都来自一个活细胞，而显微镜直接计数法会将死亡的枯草芽孢杆菌也计算在内

(3) 利用待分离样品中各种分子带电性质的差异及分子本身的大小、形状的不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离 SDS 带有大量的负电荷，且能使蛋白质变性成为肽链，使蛋白质的迁移速率只与蛋白质的相对分子质量有关，而与所带电荷性质无关

(4) 菌液

【分析】统计菌落数目的方法：

（ 1 ）显微镜直接计数法

原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量。

（ 2 ）间接计数法（活菌计数法）

原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌．通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。

【详解】（ 1 ）分析题意，要检测枯草芽孢杆菌对番茄灰霉病菌的抑制作用，先把适量的番茄灰霉病菌菌液涂布于固体培养基上，将无菌滤纸片在枯草芽孢杆菌菌液中浸泡后覆盖于固体培养基中心，若对番茄灰霉病菌有抑制作用，被覆盖的位置的番茄灰霉病菌就会被杀死，培养皿倒置培养后会出现抑菌圈，测量抑菌圈大小以判定抑菌效果强弱。

（ 2 ）枯草芽孢杆菌为好氧微生物，采用摇床震荡培养可增大培养液的溶氧量，有利于枯草芽孢杆菌的生长繁殖。培养过程中要抽样检测活菌数量，应该采用稀释涂布平板法，用稀释涂布平板法在培养基上看到的每一个菌落都来自一个活细胞，而显微镜直接计数法会将死亡的枯草芽孢杆菌也计算在内。

（ 3 ）电泳分离蛋白质混合样品的原理是：利用待分离样品中各种分子带电性质的差异及分子本身的大小、形状的不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离。 SDS 带有大量的负电荷，且能使蛋白质变性成为肽链，使蛋白质的迁移速率只与蛋白质的相对分子质量有关，而与所带电荷性质无关。

（ 4 ）长期保藏枯草芽孢杆菌，应该将培养的菌液转移到灭菌好的甘油瓶中，与甘油充分混合，放在 -20℃ 的冷冻箱中保存。